一、产品概述
本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对小鼠Nanog蛋白的兔多克隆抗体(货号：A300-398A)。该抗体特异性识别Nanog蛋白第255位至C端（第305位）之间的表位，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联任何标记物。已验证反应种属为小鼠，推荐应用于Western Blot（WB）检测。
Nanog是一种同源盒转录因子，在胚胎干细胞（ES细胞）自我更新维持及分化延迟中发挥核心调控作用。可靠的特异性抗体是研究多能性维持机制、干细胞分化轨迹及重编程效率的关键工具。
二、详细规格参数
参数 | 信息
靶标 | Nanog（Nanog homeobox）
反应种属 | 小鼠
应用 | WB
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
形式 | 完整IgG
免疫原 | 第255位至C端之间
亚型 | IgG
偶联物 | 未偶联
纯度 | 抗原亲和纯化
免疫原种属 | 小鼠
浓度 | 1000 µg/ml
存储条件 | 2–8 °C
有效期 | 收货后1年
缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠
三、抗原表位与生产信息
该抗体识别的小鼠Nanog表位位于第255–305残基之间，参考序列号为TrEMBL Q80Z64（GeneID 71950）。免疫原对应第255位至C端区域。
纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，仅富集针对该表位的高亲和力IgG分子，有效降低非特异性背景。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处的吸光度为1.4）。
关键提示：Nanog同源盒区域位于约第95–154位氨基酸，本抗体的识别表位位于C端（255–305），远离DNA结合结构域。这一设计避免了因同源盒高度保守导致的潜在交叉反应，但对Nanog截短突变体（如缺失C端的变体）可能无法识别。
四、应用方法与推荐条件
4.1 免疫印迹（WB）
推荐稀释比：1:2000 至 1:10,000
通用条件：
封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST
一抗孵育：4°C过夜
检测二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP偶联抗体（货号A120-101P）
样品制备建议：
Nanog分子量约35–42 kDa（受翻译后修饰影响），建议使用10–12% SDS-PAGE或4–12%梯度凝胶。
使用小鼠胚胎干细胞（如R1、E14、CGR8）裂解液作为阳性对照。分化的细胞（如添加LIF撤除处理3–5天）中Nanog表达显著下降，可作为阴性对照验证。
推荐上样量：20–30 µg总蛋白/泳道。
转印与曝光：
转膜可使用PVDF膜（预先甲醇活化）或硝酸纤维素膜。
建议使用ECL化学发光底物，曝光时间从30秒至5分钟进行调整。Nanog在未分化ES细胞中丰度适中，通常可获得清晰条带。
4.2 重要说明
本抗体未验证用于免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF）或免疫组化（IHC）。如需这些应用，建议自行测试或选择其他验证过的产品。所有WB实验均需设立内参对照（如GAPDH、β-actin或Histone H3），以校正上样量差异。
五、储存与稳定性
未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致IgG聚集和活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。
缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂，可抑制微生物污染。若后续实验中需进行细胞培养或涉及体内注射，请通过脱盐柱或透析去除叠氮化钠。分装建议：若需频繁取用，可在无菌条件下将抗体分装至低蛋白吸附管中，但分装后仍需冷藏，不可冻存。
六、Nanog功能背景与研究应用价值
6.1 蛋白功能概述
Nanog是ANTP类同源盒转录因子家族成员，在小鼠早期胚胎及胚胎干细胞中特异性高表达。其核心生物学功能包括：
维持ES细胞多能性：Nanog与Oct4、Sox2构成核心转录调控网络，共同激活多能性相关基因（如Rex1、Utf1、Fgf4）并抑制分化基因（如Gata6、Cdx2）。
延迟谱系定向：在胚胎发育过程中，Nanog表达下调是外胚层向原始内胚层或滋养层分化的前提条件。过表达Nanog可使ES细胞在缺乏LIF的情况下仍维持未分化状态。
促进体细胞重编程：在iPSC诱导过程中，Nanog的强制表达可提高重编程效率，是获得完全多能性所必需的因素之一。
6.2 表达模式特征
时间：在小鼠受精卵中开始表达于桑椹胚期，于内细胞团中达到高峰，原肠运动后迅速沉默。
空间：仅表达于内细胞团及原始外胚层，滋养层和已分化的胚外组织无表达。
细胞水平：Nanog表达具有异质性，即使在同一未分化ES细胞群体中，约10-30%细胞呈高表达状态，其余细胞表达水平较低但可动态转换。
6.3 抗体应用场景举例
1. ES细胞多能性鉴定：通过WB检测不同传代批次或不同培养条件下Nanog蛋白水平，快速评估细胞多能性状态。
2. 分化时间进程监测：在撤除LIF或添加视黄酸诱导ES细胞分化后，每隔24小时取样检测Nanog表达下降曲线。
3. 重编程效率分析：转染重编程因子（Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc）后不同天数，检测Nanog的再度激活，作为iPSC克隆形成的早期标志。
4. 基因敲低/过表达验证：使用siRNA或过表达质粒干扰Nanog后，WB检测酸低效率或外源蛋白表达水平。
