DSI819Mu01小鼠腹膜纤维化模型制作
一．简介：
腹膜纤维化（peritoneal fibrosis, PF）是长期腹膜透析（peritoneal dialysis, PD）患者最常见的严重并发症之一。腹膜透析作为终末期肾脏病（ESRD）有效的肾脏替代治疗手段，在我国已得到广泛应用，PD人口已逾9万人，占全球PD患者总数的33%。然而，由于腹膜透析液中的高糖、低pH值及反复发生的腹膜炎等因素的长期刺激，腹膜组织逐渐发生纤维化增厚，导致超滤功能衰竭。腹膜纤维化所导致的超滤衰竭是患者退出腹膜透析最主要的原因，严重限制了腹膜透析的长期技术存活率。
腹膜纤维化的发病机制复杂，目前认为慢性炎症是关键的始动因素。在透析液或腹膜炎等致病因素的持续刺激下，腹膜间皮细胞发生损伤与转分化，促炎细胞因子（如TGF-β1、IL-6）和促纤维化因子大量释放，激活成纤维细胞，导致细胞外基质过度沉积。深入研究其发病机制并探索有效的干预策略，已成为改善PD患者长期预后的迫切需求。
建立稳定、可靠的动物模型是揭示腹膜纤维化发病机制、筛选抗纤维化药物及评估新型治疗策略的重要基础。目前，腹膜纤维化动物模型主要通过化学性损伤（如腹腔注射葡萄糖酸氯己定）、高糖腹膜透析液刺激或细菌性腹膜炎诱导等方法构建，其中大鼠和小鼠是最常用的实验动物。这些模型能够较好地模拟人类腹膜纤维化的病理特征——腹膜明显增厚、胶原纤维大量沉积、炎症细胞浸润及间皮细胞损伤。凭借与人类疾病的高度相似性，腹膜纤维化动物模型已被广泛应用于纤维化机制解析、抗纤维化药物筛选及新型治疗策略的临床前验证等领域，是该领域不可或缺的实验工具。
- 实验材料：
1.货号：DSI819Mu01
2.实验动物：SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为6-8w，体重为22g~25g
三．标准化建模方案：
本模型采用行业通用、成模稳定性最优的高糖腹膜透析液联合脂多糖（LPS）诱导法，精准模拟临床长期腹膜透析所致的慢性炎症与纤维化病变，标准化操作流程如下：
1. 试剂准备：配置4.25%高糖腹膜透析液，搭配无菌脂多糖（LPS）工作液，全程无菌配制、过滤除菌，保障试剂纯度与实验安全性。
2. 建模给药：模型组小鼠腹腔注射4.25%高糖腹膜透析液，每日1次，每次1mL/10g体重；每周辅助腹腔注射LPS溶液（0.1mg/kg），持续干预28天，逐步诱导腹膜慢性炎症、间皮损伤及纤维化病变。
3. 空白对照：对照组小鼠同期腹腔注射等量无菌生理盐水，干预周期与操作方式完全一致，排除操作、溶剂等无关变量干扰，保证实验对照严谨性。
四．多维度模型效果验证体系：
PF小鼠模型的鉴定可从功能表型、组织病理、炎症纤维化分子靶点、通路基因表达四个维度展开，形成标准化鉴定体系，全方位验证腹膜纤维化成模效果，确保模型仿真度高、批次稳定、数据可靠.
（一）腹膜功能与宏观表型监测
全程监测小鼠体重、精神状态、腹部体征及活动度，观察模型小鼠是否出现腹部轻微膨隆、活动减少等慢性损伤表型。造模结束后通过腹膜通透功能检测，评估腹膜超滤功能变化，模型小鼠普遍出现腹膜通透性异常、超滤能力下降，精准复刻临床透析功能衰竭核心特征。
（二）腹膜组织病理学检测（HE&Masson染色）
病理染色是模型鉴定的“金标准”。取小鼠腹壁腹膜组织进行切片染色，HE染色可见模型小鼠腹膜组织明显增厚、间皮细胞脱落、大量炎症细胞浸润、组织水肿增生；Masson染色可见腹膜组织蓝色胶原纤维大量沉积、纤维组织异常增生、组织结构紊乱，与人类腹膜纤维化病理表型高度一致。
（三）炎症与纤维化分子靶点检测
采用ELISA、液相芯片等技术检测小鼠血清及腹膜组织上清中炎症、纤维化核心指标。模型组小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β显著升高，纤维化标志性蛋白Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、FN（纤连蛋白）、α-SMA表达大幅上调，炎症微环境激活、纤维化通路持续活化，符合疾病典型分子特征。
（四）核心通路基因表达验证
通过qPCR、Western Blot技术检测腹膜组织纤维化关键通路基因与蛋白表达，包括TGF-β/Smad、EMT、PI3K/Akt等核心通路。模型小鼠TGF-β、Smad2/3、α-SMA等促纤维化基因显著上调，E-cadherin等抑纤维化基因下调，证实上皮间质转化、纤维化信号通路持续激活，从分子层面验证模型有效性。
图一：Masson染色评估小鼠腹膜组织病理形态(上：对照组；下：模型组)
五．广泛的应用场景
（一）腹膜纤维化发病机制研究
可用于探究腹膜透析相关性纤维化的慢性炎症调控、氧化应激损伤、上皮-间质转化（EMT）、肠道菌群紊乱等核心发病机制；深度解析TGF-β/Smad等纤维化核心通路的调控网络，阐明腹膜纤维化渐进性发展的分子机理，为疾病机制研究提供可靠模型支撑。
（二）抗纤维化药物筛选与疗效评价
广泛应用于化学小分子药物、天然活性产物、中药复方、靶向抑制剂等各类候选药物的临床前疗效评价。可系统评估药物对腹膜炎症、胶原沉积、腹膜增厚、超滤功能损伤的改善效果，助力筛选高效、低毒的抗腹膜纤维化治疗药物。
（三）新型干预策略临床前转化研究
作为标准化临床前研究平台，可验证基因干预、干细胞治疗、靶向通路阻断、物理干预等新型疗法的有效性与安全性；同时可依托模型筛选腹膜纤维化早期诊断、病情分级的特异性生物标志物，推动基础科研成果向临床透析并发症治疗转化。
（四）疾病危险因素与病因学探索
可模拟长期高糖透析、反复炎症刺激、氧化应激损伤等临床高危诱因，探究各类环境与理化因素对腹膜纤维化发生、进展、恶化的调控作用，为临床优化腹膜透析方案、预防透析并发症提供实验依据。
六．结语
腹膜纤维化动物模型作为长期腹膜透析相关并发症研究的核心工具，其科学价值已在纤维化机制解析、抗纤维化药物筛选及新型防治策略验证等方向得到充分验证。然而，模型构建成功只是研究的起点——从腹膜组织病理学鉴定（Masson染色评估腹膜厚度及胶原沉积），到纤维化相关标志物（TGF-β1、FN、α-SMA、Col I等）的精确定量，每一个环节都关乎研究成果的可靠性与可转化性。
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